Examinando por Materia "Retrovirus"

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    Construcción y expresión de una proteína recombinante de la envoltura del virus linfotrópico humano tipo I (HTLV-I).
    (2014-01-22) Ordóñez, Paula; Cerón, Flavio; García Vallejo, Jesús Felipe
    El virus linfotrópico humano tipo I de las células T (HTLV-I) es un oncorretrovirus asociado con la leucemia de células T adultas (ATL) y la Paraparesia Espástica Tropical (PET). El gen env del virus codifica la glicoproteína precursora gp62, que mediante procesamiento produce la gp21 (transmembranal) y la gp46 (superficie). Se ha demostrado la alta inmunorreactividad de la gp46 en sueros de individuos infectados. Con el propósito de obtener una proteína recombinante útil en diagnóstico y en una potencial vacuna, se clonó en el vector de expresión de Baculovirus “bácmido” pBlueBac4.5His el segmento de 144bp obtenido mediante reacción en cadena de la polimerasa (PCR) con cebadores que amplifican la región 5622-5765 nt. El construido pBlueBacRENV fue transfectado en células del insecto Mamestrae brassicae (clon MB 8003) recuperándose la proteína recombinante. La proteína RENV reaccionó específicamente con suero de personas infectadas con HTLV-I. Los resultados obtenidos mostraron que la proteína RENV puede ser utilizada para el diagnóstico serológico de la infección por HTLV-I y en la evaluación de nuevas vacunas. Human T-Cell Lymphotropic Virus Type I (HTLV-I) is an oncoretrovirus associated with Adult T-Cell Leukemia/ Lymphoma (ATL) and Tropical Spastic Paraparesis (TSP). The viral env gen encodes gp62 glycoprotein precursor that is cleavage to produce the gp21 (transmembrane) and gp46 (surface). Previous reports showed that gp46 is highly immunoreactive in sera from infected individuals. With the purpose to obtain a recombinant protein to be used for diagnosis and potential vaccine, we cloned into Baculovirus expression vector pBluebac4.5His bacmids, the 144bp segment obtained by PCR with primers for 5622-5765 nt region. The construct pBlueBacRENV was transfected into insect cells of Mamestrae brassicae (MB 8003) and the recombinant protein was recovered. The protein showed cross reactions with sera of HTLV-I infected people exclusively. These results enabled us to propose this protein can be used in serologic diagnosis for HTLV-I infection and as a candidate for a vaccine.
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    PublicaciónAcceso abierto
    Inmunogenicidad diferencial de dominios de las glicoproteínas de la envoltura del HTLV-I.
    (2014-02-07) García Vallejo, Jesús Felipe; Balcázar Morales, Norman
    Mediante inmunoblot se evaluó la reactividad de las glicoproteínas en diferentes regiones de la envoltura viral de anticuerpos presentes en el suero de individuos seropositivos para HTLV-I provenientes del municipio de Tumaco. Se determinó que la porción carboxilo-terminal de la gp- 46 es la más inmunodominante (aminoácidos 166-308), pues presentó cifras variables de reactividad de 80% a 100%. Esta región podría ser una candidata potencial para desarrollar una vacuna con espectro amplio a nivel mundial. Además, la región comprendida entre los aminoácidos 166-201 de la gp-46 del HTLV-I se reconoció en 100% de los sueros provenientes de individuos con PET/ HAM (paraparesia espástica tropical/mielopatía asociada con la infección por HTLV-I ) y sólo en 80% de portadores sanos (p = 0.004), diferencia que es estadísticamente significativa. Este resultado permi-tió proponer que durante la progresión de la enfermedad se presentarían cambios funcio-nales en determinadas porciones de la proteína de superficie de la envoltura, que de algún modo modula la respuesta inmune humoral del individuo seropositivo para HTLV-I. By Western Blot, the reactivity of seropositive individuals from the town of Tumaco, against different regions of the viral envelope glycoproteins was evaluated. It was determined that the carboxyl end of the gp-46 (amino acids 166 to 308) had the maximum immunoresponse with a ratio of reactivity ranging from 80% to 100%. This region represents a potential for developing a broad spectrum vaccine. Furthermore the region between aminoacids 166-201 of the gp-46 of HTLV- 1 revealed a compatible reaction with sera from 100% of individuals with TSP/HAM (tropical spastic paraparesis/ HTLV-I associated myelopathy), in contrast, only 80% of sera from asymptomatic individuals yielding a positive reaction, (p = 0.004) was observed. Based on these results, it is proposed that during the progress of a viral infection, functional changes in defined regions of the envelope glycoprotein would modulate the immunoresponse in HTLV-I seropositive individuals.