Determinación de la Fosfatasa Ácida Tartrato resistente en muestras óseas decalcificadas de cerdo sus Domesticus.
Valencia, Carlos | 2015-10-02
Introducción: Las técnicas de Inmunohistoquímica
son hoy en día una de las
herramientas más importantes en el diagnostico
histopatológico, sin embargo la
manipulación de las muestras y el método
de procesamiento puede llevar a cambios
en la estructura de las proteínas que llevan a
enmascaramiento de antígenos, dificultando
la identificación con anticuerpos. Entre
los diferentes métodos de recuperación antigénico
propuestos en la literatura, el de
calor húmedo con Vaporera ha tenido gran
aceptación por su simplicidad, control y
bajo costo.
Objetivo: En el presente trabajo se propone
un protocolo de recuperación antigénica
con calor húmedo, en muestras de tejido
óseo que ya habían sido previamente fijadas
en formaldehido, decalcificadas con etilendiaminotetraacético
(EDTA), e incluidas
en parafina.
Materiales y método: Se utilizaron muestras
de tejido óseo de cerdo que habían sido
preparadas con técnicas convencionales,
pertenecientes a la colección del laboratorio
de patología de la Universidad del Valle.
Se realizó refijacion en glutaraldehido y
se empleó una vaporera para intensificar
la exposición de antígenos. Se utilizó
como anticuerpo primario el anti TRAP de
DEKO®, monoclonal, originado en ratón,
y como secundario el KIT UltraVision
LP Large Volume Detection System HRP
Polymer ®.
Resultados: En todas las muestras expuestas
al anticuerpo primario en diluciones
1:20 y 1:40 se observó inmunotinción de
células mononucleares compatibles con
pre osteoclastos, y células gigantes multinucleadas
compatibles con osteoclastos.
Conclusiones: La recuperación antigénica
con calor húmedo es un método confiable
en la recuperación antigénica de muestras
óseas fijadas con formaldehido. SUMMARY
Introduction: Nowadays, Immunohistochemistry
are one of the most important
techniques in the histopathological diagnosis.
Despite of handling and processing cautions,
both of them may generate changes
in the protein structure, masking antigens,
preventing antibody identification. Among
different antigen retrieval methods proposed
by the literature, the humid heat with
Steamer has been widely accepted for its
simplicity, control and low cost.
Objective: In this paper a protocol for
humid heat antigen retrieval use in bone
tissue samples that had been previously
fixed in formaldehyde, decalcified with
ethylenediaminetetraacetic (EDTA ), and
embedded in paraffin is proposed.
Materials and methods: Samples of pig’s
bone that had been prepared with conventional
techniques, from the collection of
the pathology laboratory of the University
of Valle were used. New fixed process was
performed in glutaraldehyde and a steamer
was used to enhance antigen exposure. The
anti-TRAP DEKOs ®, mouse monoclonal
antibody was used as primary antibody,
and the KIT UltraVision LP Large Volume
Detection System HRP Polymer ® was
used as a secondary antibody.
Results: In all samples exposed to primary
antibody in 1:20 and 1:40 dilutions immunostaining
mononuclear cells compatible
with preosteoclasts were observed; immunostaining
multinucleated giant cells
consistent with osteoclasts were described.
Conclusions: Humid heat for antigenic
recovery is a reliable method for the recovery
of bone antigen samples fixed with
formaldehyde.
LEER
