Obtención de papaína a partir del látex de la Carica-Papaya por medio de un sistema de dos fases acuosas

Abstract

Se utilizó un sistema de dos fases acuosas polietilenglicol 6000 (PEG) - sulfato de amonio para purificar papaína contenida en el látex de la Carica papaya. Se obtuvo un sistema líquido-líquido formado por una fase inferior donde se concentró el sulfato de amonio y una fase superior donde se concentró el PEG, la enzima se recuperó en esta última. La fase superior se separó del sistema, se le adicionó KClO4 en solución y se aumentó su concentración de PEG hasta 20 % (p/p), esto ocasionó la precipitación de la enzima hacia la solución salina. Posteriormente se liofilizó a ¿ 80 °C y 9,8 Pa para obtener el producto en polvo. Se determinó la actividad enzimática del producto por medio de un método analítico para cuantificar la actividad proteolítica vegetal y se calculó la concentración de la enzima por medio del método cuantitativo de Biuret. A partir de estos valores se determinó la actividad específica de la enzima que fue la variable de respuesta. Se evaluó el efecto de la concentración inicial de la muestra, el pH, la concentración de PEG y la concentración de sulfato de amonio, para determinar las mejores condiciones de purificación. Las variables que tuvieron un efecto significativo en el proceso fueron el pH, la concentración inicial de la muestra y la concentración de sulfato de amonio. La actividad específica se favoreció para el nivel alto de concentración de sulfato de amonio y los niveles bajos de pH y concentración inicial de la muestra. El mejor sistema de purificación consistió en 12% PEG 6000, 15% sulfato de amonio, 10 mg/ml de muestra inicial y se efectuó a pH 4. Por medio de este sistema se obtuvo un producto con actividad específica de 6560 U/mg.