Examinando por Autor "Fierro Pérez, Leonardo"
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Publicación Acceso abierto Análisis por elementos finitos de la influencia de las variaciones estructurales en el comportamiento biomecánico del disco intervertebral lumbar normal de un trabajador promedio colombiano.(2019-10-15) Gómez Salazar, Lessby; Fierro Pérez, Leonardo; García Alvarez, José JaimeLos trastornos degenerativos del disco intervertebral, son un grave problema de salud pública a nivel nacional e internacional, cuya etiología es reconocida como multicausal. Entre los factores de riesgo asociados a su aparición se mencionan las diferencias anatómicas entre individuos. Sin embargo, aun cuando la literatura reporta variaciones en la estructura del disco intervertebral relacionadas con la forma y tamaño del núcleo pulposo, el número de capas y la orientación de las fibras en el anillo fibroso, su influencia en el comportamiento biomecánico del disco intervertebral en condiciones fisiológicas y laborales en tareas como el transporte de bultos es un tema poco estudiado que se convierte en el objetivo de esta investigación.Publicación Acceso abierto Caracterización del veneno de serpiente Porthidium Lansbergii y purificación de una fosfolipasa A2 con efecto antitumoral sobre células de cáncer de cuello uterino(Universidad de Valle, 2018) Jiménez Charris, Eliécer de Jesús; Fierro Pérez, LeonardoEn estados avanzados del cáncer de cérvix, los tratamientos usualmente combinan radio y quimioterapia. Desafortunadamente, este tipo de cáncer puede recidivar después del tratamiento, por lo cual los pacientes frecuentemente abandonan el tratamiento buscando preservar su calidad de vida, pero poniendo en riesgo su sobrevivencia. Por lo tanto, en la búsqueda de nuevos enfoques terapéuticos orientados a intervenir el microambiente del tumor sin afectar s células sanas, las proteínas provenientes de los venenos de serpiente han demostrado ser eficaces. Objetivos: El objetivo principal de este trabajo fue caracterizar bioquímicamente el veneno de la serpiente P. lansbergii lansbergii y evaluar el efecto biológico de una de sus Asp49¿PLA2 sobre una línea de adenocarcinoma de cérvix. Metodología: Este proyecto se enmarcó en el desarrollo de nuevos medicamentos que pueden ser efectivos para el tratamiento contra el cáncer de cuello uterino en humanos. En la primera fase, se determinó el perfil proteico del veneno de P. lansbergii lansbergii mediante SDS¿PAGE, MALDI¿TOF¿ TOF y nESI¿MS/MS; mientras que la letalidad y las actividades funcionales tanto in vitro como in vivo fueron evaluadas, en orden de conocer las características bioquímicas y efectos fisiopatológicos del veneno. En la segunda fase, se purificaron dos de sus fosfolipasas A2 más abundantes por HPLC y se realizó su identificación mediante MALDI¿TOF¿TOF. Las actividades funcionales in vivo se determinaron sobre ratones CD¿1. En la tercera fase, se escogió a la PLA2 inocua ¿Pllans¿II¿ para ser evaluada como posible agente anticancerígeno y anti¿angiogénico. Resultados: se caracterizó el veneno de P. lansbergii lansbergii, identificando 12 familias de proteínas conocidas: SVMPs, fosfolipasas A2, desintegrinas, péptidos pequeños, lectina tipo C, serina proteinasas, L¿amino acido oxidasas, CRISP, 5' nucleotidasas, svVEGF, fosfolipasas B y fosfodiesterasas. Funcionalmente, el principal mecanismo de inmovilización de la presa por el veneno podría ser el sangrado, la generación de una permeabilidad vascular y extravasación; produciendo un estado hipovolémico que conlleva a un choque hipovolémico. Las Asp49¿PLA2s purificadas presentaron una masa de 14,136 ± 3 y 13,960 ± 3 Da. Los ensayos determinaron que Pllans¿I en contraste con Pllans¿II, fue letal y presentó actividad citotóxica, miotóxica, y anticoagulante. Pllans¿II, una enzima monomérica mostró una citotoxicidad dosis dependiente y disminuyó la migración de las células de adenocarcinoma de cérvix ¿ HeLa, por interferencia de las integrinas ¿5 y ß1. Además, Pllans¿II generó arresto del ciclo celular en G1 y estimuló la muerte celular apoptótica. Interesantemente, Pllans¿II tuvo la capacidad de inhibir la formación de nuevos vasos sanguíneos sobre las células HUVEC. Conclusión: Por sus características especiales, Pllans¿II podría ser empleado como un agente anticancerígeno para el desarrollo de nuevos prototipos antitumorales. Sería interesante evaluar el efecto de Pllans¿II sobre la tumorigénesis in vivo, sin menospreciar una mejor comprensión del mecanismo de muerte celular, el potencial de inhibición de la metástasis y estudios funcionales para conocer la interacción de Pllans¿II con los receptores de integrinas en las células cancerígenasPublicación Acceso abierto Efecto de la terapia de voz sobre los parámetros morfo-funcionales, perceptuales y acústicos de la voz de personas con disfonía funcional en Santiago de Cali, 2014-2016.(2017-02-27) Rodríguez Campo, Alejandro; Fierro Pérez, Leonardo; Sastoque Hernández, María EsperanzaLa investigación Efecto de la terapia de voz sobre los parámetros morfo-funcionales, perceptuales y acústicos de la voz de personas con disfonía funcional en Santiago de Cali, 2014-2016 fue financiada por la convocatoria interna 1-2014 de la Vicerrectoría de Investigaciones de la Universidad del Valle. Tuvo como objetivo valorar el efecto de la terapia de voz mixta y directa en personas con disfonía funcional. En la práctica clínica del fonoaudiólogo, cuando realiza procedimientos de rehabilitación de las deficiencias en la función vocal que conlleva a limitaciones en las actividades de comunicación secundarias a la disfonía funcional, se considera que la terapia indirecta, consistente en medidas de higiene vocal recomendadas por el fonoaudiólogo e implementadas en su vida diaria por el mismo paciente, es determinante en la evolución favorable del programa de rehabilitación1. Sin embargo, algunos estudios plantean que la mejoría de los pacientes con disfonía por tensión muscular es la misma cuando se emplea una terapia de voz directa, independiente de que se hagan o no recomendaciones de higiene vocal a los pacientes. Considerando, entonces, en el entorno de la práctica clínica del fonoaudiólogo, 1) que esta no está ampliamente fundamentada en la implementación de la terapia de voz basada en evidencia investigativa, y 2) que, la valoración y el seguimiento de los programas de rehabilitación se fundamentan casi exclusivamente en el análisis perceptual, en esta investigación: 1) Se seleccionó una muestra homogénea de 20 personas entre 20 y 60 años a quienes se les realizó por análisis perceptual y laringoscópico el diagnóstico de disfonía funcional. 2) Se evaluó a toda la muestra mediante nasofibrolaringoscopia para establecer la condición de su estructura laríngea, y la función vocal con el análisis perceptual de la voz a través de la escala GRBAS y el análisis acústico por medio del software Anagraf. 3) Se fraccionó la muestra en dos grupos, el primer grupo experimental que recibió terapia de voz mixta y el segundo únicamente terapia de voz directa. 4) Se evaluó nuevamente con las pruebas realizadas antes de la intervención, y con los resultados obtenidos se comparó el efecto de los dos esquemas de terapia de voz propuestos. Este diseño cuasi experimental permitió aportar evidencia a la respuesta de las preguntas que se plantearon: 1) ¿Cuáles son las características de los parámetros morfo-funcionales, perceptuales y acústicos de la voz de un grupo de personas con disfonía funcional? 2) ¿La terapia de voz mixta mediante recomendaciones de higiene y educación vocal tiene un efecto adicional en la mejora de personas con disfonía funcional tratados con una terapia de voz directa? Como resultados de esta investigación en relación con los parámetros morfo-funcionales se encontró que entre el 30 y 40% presentaron trastorno isométrico laríngeo, entre el 10 y 30% trastorno de contracción lateral, la mayoría presentó edema y edema más eritema, respectivamente en la mucosa laríngea. En los parámetros perceptuales el 50% presentó aspereza moderada y 40% aspereza leve, entre el 60 y 50% tensión moderada, 30% tensión severa y 20% tensión leve. En cuanto a los parámetros acústicos las medidas de perturbación vocal, de ruido y el índice de perturbación vocal se encontraron alterados. La terapia de voz mixta presentó mayores cambios en los parámetros evaluados específicamente sobre las variables de ¿Estado de la mucosa laríngea, ¿Astenia¿, ¿Tensión¿, ¿Shimmer¿ y ¿Amplitud del pico de Cepstrum observados con la estadística descriptiva. Sin embargo, estos cambios en su mayoría no fueron estadísticamente significativos con las pruebas de inferencia realizadas para validar o rechazar la hipótesis planteada. La única variable con significancia estadística fue la del ¿índice de perturbación vocal integrado¿ para el grupo de la terapia de voz mixta.Publicación Acceso abierto Estudio sobre la composición y la actividad biológica de las neurotoxinas y las cardiotoxinas presentes en el veneno del escorpión Tityus forcípula (Scorpiones: Buthidae) del municipio de Cali.(Universidad del Valle, 2019) Moreno Vélez, Franklin Helid; Fierro Pérez, Leonardo; Castaño Valencia, SantiagoSe estudió por primera vez el veneno del escorpión Tityus forcípula de la localidad de Cali, y algunas de sus fracciones, así como el transcriptoma de la glándula productora del veneno. Modelos murinos envenenados de forma experimental mostraron síntomas de envenenamiento central y autonómico, efecto cronotrópico negativo y alteraciones hemodinámicas y de la función pulmonar. La inyección subplantar del veneno entero en ratones causó una intensa respuesta de fase aguda y de fase crónica. Las variables de la química sanguínea en ratas experimentalmente envenenadas evidenciaron la activación de cascadas inflamatorias y la alteración del perfil glucémico. El veneno entero presentó actividad enzimática significativa (proteasa, fosfolipasa e hialuronidasa), lo que probablemente contribuye a la rápida difusión del veneno y a sus efectos tóxicos. Se evaluó por primera vez la toxicidad del veneno (DL50=2.39 ± 0.05 mg/kg ratón, Pc=1.02 mg de proteína soluble), siendo la más alta reportada para especies colombianas y similar a las de escorpiones bútidos de regiones vecinas, que han sido asociados con accidentes fatales, principalmente en niños. Mediante LC-MS se determinó la huella de masas moleculares del veneno de T. forcipula (VMF), y se identificaron 44 masas individuales, con rangos reconocidos por incluir péptidos que modifican la actividad de los canales NaV y KV. Mediante tecnologías de secuenciación de nueva generación (plataforma Illumina) se hizo el análisis transcriptómico de la glándula de veneno en estado -activo¿. Se identificaron 218 componentes putativos del veneno, con una composición típica del veneno de las especies del género Tityus del Nuevo Mundo, incluyendo numerosos transcritos putativos codificantes para proteínas relacionadas con procesos celulares, así como péptidos y proteínas relacionadas con componentes del venenoMás del 60% de los transcritos de componentes putativos del veneno correspondió con enzimas. También se identificaron ¿ y ß-NaTx (13.8%), así como ¿, ß y ¿-KTx (9.2%) y porcentajes menores de transcritos codificantes para péptidos antimicrobianos, inhibidores de proteasa y proteínas ricas en cisteína, entre otros. Las toxinas putativas de T. forcipula presentaron alta similitud con otras previamente reportadas para especies distribuidas al norte de la cuenca amazónica, como T. pachyurus, T. zulianus y T. obscurus. Se fraccionó el veneno mediante cromatografía HPLC y se determinó el perfil proteómico. Se secuenciaron parcialmente mediante degradación automatizada de Edman, cinco péptidos aislados del veneno, identificados como ¿ y ß-sodio toxinas, y fue secuenciado totalmente un péptido identificado como ¿-potasio toxina. Las secuencias de estos péptidos fueron identificadas en el transcriptoma. Se estudió la actividad del veneno entero y algunas fracciones homogéneas, sobre el canal hNaV1.5, expresado de forma transitoria en células HEK 293, en experimentos de electrofisiología de voltaje controlado en modo de célula entera. El veneno entero de T. forcipula inhibió la corriente máxima en una forma dependiente de la concentración. La subfracción III-3(9), de 7350 Da, que correspondería con una alfa toxina activa sobre canales de sodio dependientes de voltaje, fue el péptido más tóxico del veneno en experimentos con ratón, y en ensayos de electrofisiología inhibió la corriente pico en un 40% y desplazó la curva de activación hacia la derecha. Considerados en conjunto, los resultados anteriores indican que el veneno de T. Forcipula presenta toxicicidad moderada en comparación con el de especies cercanas asociadas a 3 accidentes fatales. Sin embargo, el envenenamiento severo por picadura de T. forcipula, especialmente si las víctimas son niños, podría requerir atención médica, y monitoreo de posibles secuelas de lesión miocárdica y pancreática, entre otrasPublicación Acceso abierto Reposicionamiento in silico y diseño estructural de nuevas moléculas para el tratamiento de la esquizofrenia(Universidad de Valle, 2020) Vasquez Paz, Bryan David; Mejía Gutierrez, Melissa Andrea; Fierro Pérez, LeonardoSe realizó un estudio de reposicionamiento in silico utilizando diferentes herramientas computacionales: Acoplamiento Molecular y Modelado del Farmacóforo. Se realizó acoplamiento molecular con tres dianas ampliamente estudiadas en el diseño de fármacos contra la Esquizofrenia, los receptores de dopamina: D2, D3 y D4. Se calculó la afinidad de setenta y siete fármacos que en estudios previos fueron reportados como prototipos a reposicionamiento para la esquizofrenia y se determinó que los fármacos que presentaron mayor acoplamiento y estabilidad a las dianas fueron: el Raloxifeno, la Linagliptina y la Flunarizina. Se analizaron las interacciones involucradas en el acoplamiento, donde se destacaron interacciones de tipo hidrofóbico. A partir de los resultados obtenidos se diseñaron cuatro nuevas subestructuras (R-06, L-09, R-52 y F-10), que presentaron mayor estabilidad. Las nuevas subestructuras tienen un radar de biodisponibilidad en los rangos aceptados para ser prototipos a fármacos. Finalmente, se propuso una síntesis química para las nuevas moléculas.