Examinando por Materia "Immunohistochemistry"
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Publicación Acceso abierto Apoptosis de fibroblastos gingivales en periodontitis.(2013-07-10) Arce, Roger Mauricio; Tamayo, Oscar; Cortés, ArmandoIntroducción: Los fibroblastos gingivales humanos (FGH) tienen un papel importante en la enfermedad periodontal, pues alteran su normal funcionamiento en respuesta a estímulos pro-inflamatorios. Se cree que los fibroblastos se pueden eliminar anormalmente por medio de apoptosis en periodontitis. El propósito de este estudio es determinar y cuantificar la apoptosis de FGH en biopsias del periodonto de individuos sanos y con enfermedad periodontal. Métodos: Se realizó un estudio clínico descriptivo de corte transversal en personas con diagnóstico de salud periodontal (S), gingivitis (G) y periodontitis crónica (PC). Se tomaron biopsias escisionales y se hicieron tinciones inmunohistoquímicas (hematoxilina-eosina, caspasa-3 y vimentina). Las placas se interpretaron por histopatología y se digitalizaron para cuantificar las células apoptóticas. Todos los datos se analizaron con un software estadístico para encontrar diferencias significativas (p<0.05). Resultados: La población celular total de fibroblastos tuvo un promedio de 430±67.6 en los individuos sanos y una disminución significativamente progresiva en gingivitis (270±37.1) y periodontitis crónica (206.5±69.8) (p<0.05). La expresión de fibroblastos apoptóticos por campo aumentó de acuerdo con las severidades de la enfermedad [28±16 en sanos (6.5%); 31±17 en gingivitis (11.5%) y 51±24 en periodontitis (24.8%.), (p<0.001)]. La relación entre la expresión de fibroblastos apoptóticos y la profundidad de la bolsa periodontal no fue significante (p>0.5, r²=0.02); mientras que para las células inflamatorias se encontró una relación proporcional significativa (p<0.05, r²=0.2018). Conclusiones: Los resultados permiten concluir que tanto los fibroblastos gingivales como las células inflamatorias presentan apoptosis manifiesta por la expresión de caspasa-3, y ésta se incrementa significativamente en gingivitis y enfermedad periodontal. Introduction: Human gingival fibroblasts (HGF) have an important role in the periodontal immune response. The fibroblasts alter their normal behavior in response to pro-inflammatory cytokines. It is believed that HGF can be diminished and/or eliminated by means of apoptosis. The purpose of this study was to determine and to quantify apoptosis of HGF in periodontium biopsies from healthy and chronic periodontitis patients. Methods: A clinical cross-sectional study in people with healthy periodontium (S), gingivitis (G) and chronic periodontitis (PC) patients was carried out. The periodontal biopsies were obtained and immunostained by means of: hematoxylin-eosin, caspase-3, vimentin and caspase-vimentin double-staining for specific visualization of apoptotic fibroblasts. Histopathological and digital analyses were performed. Descriptive statistics were applied to categorical and nominal variables. Results: Total cell population of HGF had an average of 430±67.6 cells/field in healthy people, and a significantly progressive decrease in gingivitis (270±37.1) and chronic periodontitis groups (206.5±69.8) (p<0.05). As for total population of inflammatory cells, an increase was noticed in gingivitis (191.8±50.1) and a decrease in periodontitis (109.3±21.7) without statistical significance. The expression of apoptotic HGF per field increased accordingly to the severity of the disease [28±16 in health (6.5%); 31±17 in gingivitis (11.5%) and 51±24 in periodontitis (24.8%), p<0.001]. Similar findings were observed for inflammatory cells with different percentage expression [17±13 in health (23%); 28±19 in gingivitis (14.6%) and 47±35 in periodontitis (43.1%), p<0.05]. The relationship between the percentage of expression of apoptotic cells and probing pocket depth was proportional but not significant (p>0.5, r²=0.02); while for the inflammatory cells a significant relationship was observed (p<0.05, r²=0.2018). Conclusions: The results in this report conclude that HGF and inflammatory cells show apoptosis (caspase-3 expression), and apoptotic cells are significantly increased in gingivitis and chronic periodontitis groups.Publicación Acceso abierto Determinación de la Fosfatasa Ácida Tartrato resistente en muestras óseas decalcificadas de cerdo sus Domesticus.(2015-10-02) Valencia, Carlos; Franco, Manuel; Pustovrh, Carolina; Salazar, LilianaIntroducción: Las técnicas de Inmunohistoquímica son hoy en día una de las herramientas más importantes en el diagnostico histopatológico, sin embargo la manipulación de las muestras y el método de procesamiento puede llevar a cambios en la estructura de las proteínas que llevan a enmascaramiento de antígenos, dificultando la identificación con anticuerpos. Entre los diferentes métodos de recuperación antigénico propuestos en la literatura, el de calor húmedo con Vaporera ha tenido gran aceptación por su simplicidad, control y bajo costo. Objetivo: En el presente trabajo se propone un protocolo de recuperación antigénica con calor húmedo, en muestras de tejido óseo que ya habían sido previamente fijadas en formaldehido, decalcificadas con etilendiaminotetraacético (EDTA), e incluidas en parafina. Materiales y método: Se utilizaron muestras de tejido óseo de cerdo que habían sido preparadas con técnicas convencionales, pertenecientes a la colección del laboratorio de patología de la Universidad del Valle. Se realizó refijacion en glutaraldehido y se empleó una vaporera para intensificar la exposición de antígenos. Se utilizó como anticuerpo primario el anti TRAP de DEKO®, monoclonal, originado en ratón, y como secundario el KIT UltraVision LP Large Volume Detection System HRP Polymer ®. Resultados: En todas las muestras expuestas al anticuerpo primario en diluciones 1:20 y 1:40 se observó inmunotinción de células mononucleares compatibles con pre osteoclastos, y células gigantes multinucleadas compatibles con osteoclastos. Conclusiones: La recuperación antigénica con calor húmedo es un método confiable en la recuperación antigénica de muestras óseas fijadas con formaldehido. SUMMARY Introduction: Nowadays, Immunohistochemistry are one of the most important techniques in the histopathological diagnosis. Despite of handling and processing cautions, both of them may generate changes in the protein structure, masking antigens, preventing antibody identification. Among different antigen retrieval methods proposed by the literature, the humid heat with Steamer has been widely accepted for its simplicity, control and low cost. Objective: In this paper a protocol for humid heat antigen retrieval use in bone tissue samples that had been previously fixed in formaldehyde, decalcified with ethylenediaminetetraacetic (EDTA ), and embedded in paraffin is proposed. Materials and methods: Samples of pig’s bone that had been prepared with conventional techniques, from the collection of the pathology laboratory of the University of Valle were used. New fixed process was performed in glutaraldehyde and a steamer was used to enhance antigen exposure. The anti-TRAP DEKOs ®, mouse monoclonal antibody was used as primary antibody, and the KIT UltraVision LP Large Volume Detection System HRP Polymer ® was used as a secondary antibody. Results: In all samples exposed to primary antibody in 1:20 and 1:40 dilutions immunostaining mononuclear cells compatible with preosteoclasts were observed; immunostaining multinucleated giant cells consistent with osteoclasts were described. Conclusions: Humid heat for antigenic recovery is a reliable method for the recovery of bone antigen samples fixed with formaldehyde.Publicación Acceso abierto Determination of the HER2 amplification status by in situ fluorescent hybridization and concordance with immunohistochemistry for breast cancer samples in Colombia.(2013-07-09) Plata, Adriana; Torres, Maria Mercedes; López, Rocío; Andrade, Rafael E.Objectives: To determine the status of the HER2 amplification in Breast cancer performed in peripheral laboratories in Colombia by immunohistochemistry and its comparison with central laboratories and the FISH status. Methods: Four thousand one hundred and five cases referred for the determination of the HER2 status by FISH and/or IHQ to the Department of Pathology of the Fundacion Santa Fe were studied. The analysis included correlation between the IHQ HER2 score submitted by the peripheral laboratory (PL), the HER2 score emitted in the LC and the FISH studies performed in the central laboratory (CL). Results: two thousand five hundred and eight HER2 IHQ studies were performed in the (CL), using the Dako Herceptest. With the following results: 68,2 % negative (0-1+); 16.4% indeterminate (2+); 15.3% 3+ and 2.3 % not adequate. 1360/ 1719 cases studied by FISH came from the (PL), and 329 (19.1%) from the (Lc). Comparing the IHQ score emitted by the PL and the positive FISH status showed: 6/28 0+ were positive (21. 4%); 7/31 1+ (22, 5%); 397/1,240 2+ (32. 8%) and 74/91 3+ (81. 3%). In the CL the results were 1/9 0+ (11.1%); 3/18 1+ (16.7%); 154/292 2+ (53%); and 9/9 3+ (100%). Only 1/4 negative cases (0/1+) was in house. Conclusion: The false negative rate (22%), and false positive results (18.7%), of the HER2 status performed by IHQ in peripheral laboratories in Colombia is unacceptable high as well as the inadequacy of tissue indicating that pre-analytical factors have to be improved in Colombia in order to get optimal results. Objetivos: Determinar la correlación entre el estado de amplificación del oncogén HER2 en cáncer de seno por inmunohistoquímica y FISH, en laboratorios periféricos y en un laboratorio central de referencia en Colombia. Métodos: Se estudiaron 4105 casos referidos al Departamento de Patología de la Fundación Santa fe de Bogotá para la determinación del estado de amplificación del HER2 por FISH y/o IHQ. El análisis incluyó la correlación entre los scores del HER2 por IHQ en ambos laboratorios y los estudios de FISH realizados en el laboratorio central. Resultados dos mil quinientos ocho casos fueron estudiados para HER2 por IHQ en el LC (Herceptest de DAKO); 68.2% fueron negativos (score de 0-1+); 16.4% indeterminados (2+) y 15,3% positivos (3+); 2,3% fueron inadecuados. 1360 de 1689 casos estudiados por FISH (80.5%) provenían de LP, y 329 (19.5%) del LC. En los LP se encontró amplificación por FISH en: 6/28 casos catalogados por IHQ como 0+ (21.4%); 7/31 1+ (22.5%) ; 397/1210 2+ ( 2.8%) y 74/91 3+ (81.3%). En el LC se encontró amplificación por FISH en 1/9 casos catalogados por IHQ como 0+ (11,1%); 3/18 1+ (16.7%); 154/292 2+ (53%) ; y 10/10 3+ (100%) . Un de los 4 casos falsos negativos fue procesado en su totalidad en el LC. Conclusión: Los resultados falsos negativos (22.0%) y falsos positivos (18,7%) en el estado del HER2 determinado por IHQ en los LP son inaceptablemente altos en Colombia, indicando se requiere establecer mecanismos estrictos de control de calidad .Publicación Acceso abierto Evaluación inmunohistoquímica de la expresión de calbindina en el cerebro de ratones en diferentes tiempos después de la inoculación con el virus de la rabia.(2012-11-29) Lamprea, Natalia; Torres Fernández, OrlandoIntroducción: La calbindina (CB) es una proteína reguladora del metabolismo del calcio intracelular. Previamente se demostró que la infección con virus fijo de la rabia induce pérdida de la expresión de CB, en el cerebro de ratones en estado terminal de la enfermedad, a los 7-8 días de post-inoculación (p.i.) intramuscular. Objetivo: Determinar si la pérdida de expresión de CB se presenta también en etapas tempranas de la infección y si es una consecuencia inmediata a la aparición de antígenos virales en el cerebro. Materiales y métodos: Se inocularon ratones con virus fijo de la rabia, por vía intramuscular, en su extremidad posterior izquierda. Diariamente se tomaron entre 4 y 6 animales infectados y sus respectivos controles, se fijaron por perfusión intracardíaca con paraformaldehído, se extrajeron sus cerebros y se obtuvieron cortes coronales en un vibrátomo. Estos se sometieron a reacciones inmunohistoquímicas para evaluar la presencia de antígenos virales y la expresión de CB. Esta última fue cuantificada mediante densitometría óptica en un microscopio con análisis de imágenes. Resultados: La inmunorreactividad a la rabia fue positiva en el cerebro a partir del día 3 p.i.; se observó primero en neuronas piramidales de la corteza frontal. La inmunotinción para CB no sufrió ninguna alteración cualitativa ni cuantitativa en la corteza cerebral y el estriado hasta el día 6 p.i. Conclusiones: Estos resultados coinciden con los de otros estudios sobre la rabia en los que se han encontrado alteraciones moleculares, metabólicas o fisiopatológicas en el sistema nervioso sólo en la fase terminal de la enfermedad.Introduction: The calcium-binding protein calbindin (CB) plays a critical role in intracellular calcium metabolism. In a previous study we demonstrated that the infection with fixed rabies virus caused loss of CB expression in mouse brain during terminal state of the disease, 7-8 days after intramuscular inoculation. Objectives: To determine loss of CB expression also appears in early stages of the infection and if it is a consequence immediate to the appearance of viral antigens in the brain. Materials and methods: Mice were inoculated with fixed rabies virus, by intramuscular route, in the left hind limbs. Daily, to sixth day, 4-6 animals and their respective controls were killed and fixed by intracardiac perfusion with paraformaldehyde and their brains were extracted to obtain coronal sections using a vibratome. Free-floating sections were treated by immunohistochemical procedures to evaluate the presence of rabies viral antigens and the expression of CB. The last one was quantified by optical densitometry in a microscope with a system of image analysis. Results: Rabies immunoreactivity was observed in the brain three days after virus inoculation, beginning in pyramidal neurons of the frontal cortex whereas the immunostaining for CB did not undergo any qualitative nor quantitative changes neither in the cerebral cortex or striatum during the six days post-inoculation. Conclusions: These results agree with other studies in which it has been settled down that the rabies molecular or metabolic effects on the nervous system are well-known only in the final stage of the disease.