Examinando por Materia "Cultivos organotípicos"

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    PublicaciónAcceso abierto
    Caracterización de un modelo organotípico de cultivos de neuronas corticales de humano derivadas de trauma craneoencefálico.
    (2012-11-30) Riascos, David; Guzmán, Francisco; Buriticá, Efraín; Palacios, Mauricio; Escobar, Martha Isabel; Pimienta, Hernán
    Introducción: El trauma craneoencefálico (TEC) es un problema de salud global que puede generar en los pacientes que lo padecen, muerte, discapacidad y/o alteraciones psiquiátricas con gran impacto sobre su desempeño posterior y sobre su ámbito familiar. En los últimos años se ha avanzado en el conocimiento de los mecanismos fisiopatológicos que subyacen al TCE. Sin embargo, esto no está completamente entendido, como tampoco hay claridad sobre los mecanismos de neuroprotección. Por esta razón cada vez más se buscan modelos que permitan aproximarse al estudio de este síndrome y de esta manera aproximarse a la neuroprotección. Objetivo: Caracterizar un modelo de cultivo organotípico de neuronas corticales humanas obtenidas de personas que sufrieron TCE y a las cuales se les practicó remoción de la contusión. Metodología: Se utilizó tejido cortical humano procedente de 4 individuos que sufrieron TCE y a los cuales se les removió la contusión. Se obtuvieron tajadas de corteza cerebral de 1,500-2,000 μm, las cuales se mantuvieron en un flujo continuo de LCRa a 2 ml/min y una mezcla gaseosa de O2 al 95% y CO2 al 5% con burbujeo permanente durante 2, 8 y 14 horas. Se tomó como tiempo cero el momento de obtención de la muestra. Después de cada tiempo se tomaron las tajadas, se cortaron en un vibrátomo de medio líquido a 50 μm y se procesaron inmunohistoquímicamente con los marcadores neuronales de degeneración NeuN y MAP2. Resultados: Los resultados indican que las muestras de corteza cerebral se pudieron mantener con cierto grado de integridad celular y laminar hasta las 2 horas de cultivo. Se observó que a partir de este tiempo se inicia un proceso de alteración de la citoarquitectura neuronal y laminar, determinada por la pérdida y alteración de la inmunorreactividad a los marcadores NeuN y MAP2. Además se encontró que hay vulnerabilidad celular que compromete en mayor medida a las neuronas localizadas en las láminas corticales III y V. Conclusiones: Se pudo caracterizar el modelo organotípico de cultivo de neuronas corticales humanas que determinó integridad neuronal y organización laminar clara hasta las 2 horas de evolución, lo cual permitiría la utilización de fármacos neuroprotectores durante este período. Se encontró vulnerabilidad laminar preferencialmente para las capas corticales III y V. El modelo dejó establecer la evolución temporal de las neuronas de la zona contusa. Introduction: Traumatic brain injury is a global medical problem whose survivors may show disability and neurological or psychiatric sequelae. In the last few years the knowledge of physiopathological mechanisms of TBI has increase but still it is not entirely known. For this reason the research has turn over in one´s mind in new strategies to study this pathology looking for neuroprotection. Objective: The aim of this work is to develop an organotypic culture of cortical human neurons derived from a contusion tissue obtain from patients that suffered TBI. Methodology: We used contused brain tissue from 4 TBI patients. Sections between 1,500-2,000 μm were kept in a continuous flow of aCSF 2 ml/min in a mixture of 95% O2 and 5% CO2 for 2, 8 and 14 hours. The initial time (0 hours) was the tissue extraction time. From blocks, sections of 50 μm were obtained and processed for immunocytochemistry to NeuN and MAP 2. Results: The results show that organotypic cultures keep neuron integrity and laminar organization in the cerebral cortex slices from 0 to 2 hours. From this time ahead neuronal morphology and laminar organization is altered especially in neurons located on layers III and V. Conclusions: Organotypic culture could be maintained from 0-2 hours. Neuronal and laminar integrity could be demonstrated. The model lead to study neuronal behaviour after TBI through different survival times. Laminar selective vulnerability was demonstrated for layers III and V.
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    PublicaciónAcceso abierto
    Evaluación temporal de la proteína precursora amiloide posterior a un trauma craneoencefálico utilizando un cultivo organotípico agudo en un modelo murino
    (Universidad del Valle, 2015) Aldana Castillo, Gloria Esperanza; Palacios Gomez, Mauricio; Escobar B, Martha Isabel; Buriticá Ramírez, Efraín
    El trauma craneoencefálico (TCE), es una de las principales causas de mortalidad y morbilidad en individuos menores de 45 años en el mundo. El TCE puede desencadenar una gran variedad de complicaciones como epilepsia, Alzheimer, Parkinson, alcoholismo, depresión, psicosis, suicidio, trastornos neuroendocrinos, disfunción sexual, incontinencia entre otros. Para comprender los mecanismos fisiopatológicos del TCE y su evolución; dos grupos de animales fueron sometidos a TCE empleando una versión modificada del modelo de impacto-aceleración por caída libre de peso de Marmarou y otros dos grupos de animales fueron utilizados como controles los cuales fueron sometidos al mismo procedimiento quirúrgico pero sin lesión. Los animales fueron sacrificados después de un tiempo de supervivencia de 48 y 72 horas y las muestras obtenidas fueron llevadas a cultivo durante 5 tiempos (0, 2, 4, 6 y 8 horas). Posteriormente, estas muestras fueron evaluadas con técnicas histoquímicas e inmunohistoquímicas. A nivel comportamental no se observaron alteraciones motoras después del trauma. El análisis histológico con el anticuerpo anti-NeuN mostró que existe pérdida neuronal en los sujetos lesionados. A las 4 horas de cultivo alrededor del 60% de células en los sujetos control y casi un 50% de células en sujetos lesionados, siguen siendo viables. Tanto en los sujetos control como en los sujetos lesionados, se encontró marcación aumentada del extremo N-terminal de APP en la corteza y en el hipocampo en los diferentes tiempos de cultivo. Sin embargo, este aumento fue mayor en los sujetos lesionados. El extremo C-terminal de APP sólo fue encontrado a las 6 y 8 horas de cultivo en sujetos lesionados
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    PublicaciónAcceso abierto
    Modelo de cultivo organotípico agudo de cerebro de rata para la evaluación de fármacos neuroprotectores en trauma cráneo encefálico
    (Universidad del Valle, 2016) Romero Urrea, Daniel; Palacios Gomez, Mauricio
    El trauma craneoencefálico (TCE) es una de las lesiones que tiene mayor impacto sobre una comunidad, debido a las consecuencias directas e inmediatas de éste, así como por las secuelas que genera a largo plazo, las cuales pueden ser progresivas y presentarse en los días iniciales o incluso años después. Las condiciones relacionadas con el TCE, ya son en si mismas un problema mayor; los estudios realizados han encontrado que tras el impacto primario, aumenta el riesgo de presentar síndromes epilépticos (11 veces), enfermedad de Alzheimer (4,5 veces), depresión (1,5 veces), entre otros trastornos psicoafectivos significativamente importantes. Además, el riesgo de morir es 7,5 veces mayor. Durante los últimos treinta años, la investigación de fármacos para esta entidad ha sido infructuosa; debido a esto, dentro de los grupos de investigación en neurociencias, se han trazado diferentes estrategias, para abordar desde diferentes ángulos la búsqueda de terapias que disminuyan el impacto y las secuelas que se presentan en los pacientes que han sufrido un TCE. Una de estas directrices apunta a la generación de modelos in vitro, que tengan una mayor posibilidad de predecir las respuestas neuroprotectoras de los fármacos candidatos. Partiendo de esta base, se ha considerado la posibilidad de desarrollar cultivos agudos de tajadas corticales organotípicas, provenientes de cerebros de rata que recibieron un impacto que produjo una lesión cerebral difusa según la metodología descrita por Marmarou. El modelo tiene la ventaja de que permite mantener las relaciones glía/neurona y las conexiones propias de la zona Además de conservar el contexto tisular del área a estudia.