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Validación del método de n-metil-2-fenil-indol en la cuantificación de malondialdehído como biomarcador de peroxidación lipídica en Pisum sativum por colorimetría.

Resumen en español

En el presente trabajo de investigación se llevó a cabo la validación del método de N-metil-2-fenil indol para cuantificar malondialdehído en Pisum sativum expuesta a cobre como biomarcador de peroxidación lipídica. En primer lugar se realizó la reacción entre el estándar de malondialdehído y 1,1,3,3 tetrametoxipropano evaluando la temperatura y tiempo de reacción citados en la literatura. Una vez obtenida la carbocianina producto de la reacción se determinó la longitud de onda a la cual se encontraba el máximo de absorción de la misma mediante un espectrofotómetro obteniéndose un máximo a 586 nm. De la cuantificación se obtuvo que había una cantidad de MDA significativamente diferente a la medida en las plantas control al ser estresadas con 5 mL de solución de sulfato de cobre pentahidratado 2,0 mM, es decir, que el efecto inducido por el cobre en el estrés oxidativo de la planta cuantificado a través de la reacción de peroxidación lipídica se hacía evidente con tal tratamiento. Mediante un anova de dos factores se determinó que tal tratamiento generaba una cuantificación significativamente diferente de las de las plantas control en el día octavo. Así, se obtuvo que expuestas a 4 mL de una solución 300 ¿g/mL de una fracción rica en flavonoides, las plantas estresadas a 2,0 mM retornaron a los valores de MDA en plantas donde no se indujo estrés oxidativo con cobre. De igual manera, plantas estresadas con cobre 2,0 mM al haber sido expuestas simultáneamente a una solución 400 ¿M de un compuesto tipo piridopirimida redujeron significativamente la cantidad de MDA producido. En ambos casos se verificó la capacidad inhibitoria de peroxidación lipídica, el resultado fue que tanto el compuesto de origen natural como el compuesto de origen sintético devolvieron las plantas al nivel de malondialdehído ó estrés oxidativo de los procesos metabólicos naturales de la planta (en ausencia de cobre). De la validación se obtuvo un rango lineal de 0,0078 - 1 mM mediante una prueba de correlación t student y un r2 de 0,9988. Se verificó parámetros como la linealidad obteniéndose correlación lineal mediante el anova de la regresión de la curva promedio de tres curvas de calibración realizadas en días diferentes. Se verificaron también la repetibilidad obteniéndose un coeficiente de variación total de 7,842%. La reproducibilidad se verificó mediante el análisis de dos curvas de calibración realizadas en diferentes días (bajo el mismo analista y en el mismo laboratorio) que fueron comparadas para verificar que no había diferencia significativa entre sus pendientes e interceptos. La sensibilidad se mejoró en el proceso de validación en un factor de doce veces respecto a la curva de calibración inicial. Se concluyó que el método de cuantificación de malondialdehído mediante la reacción de N-metil-2-fenilindol es satisfactorio para medir malondialdehído como biomarcador de estrés oxidativo por peroxidación lipídica en Pisum sativum expuesta a cobre; el proceso de validación realizado lo constituye en un test rápido, fácil y sensible para este subproducto de la reacción de peroxidación lipídica. Se concluye que existe capacidad inhibitoria de peroxidación lipídica en moléculas extraídas de forma natural como los flavonoides de la fracción utilizada y en moléculas de origen sintético como el compuesto tipo piridopirimidina ácido 3-metil-2-metiltio-5-(4-metoxifenil)-4-oxo-3,4,5,8-tetrahidropirido[2,3-d]pirimidin-7-carboxílico.